ecL化學發光液注意事項，由于不同品牌的抗體質量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進行優化，以取得更優效果。勿將ECL化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下，否則會導致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發出的光，然后隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持90%的光信號，至24小時仍可保持約60%的光信號；蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間；使用過少的ECL工作液不利反應進行，為達節約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素，容易產生非特異性信號。避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。