一、細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性

　　細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?，細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測所用的方法相近，但實驗?zāi)康牟煌＜?xì)胞增殖是通過細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化，例如細(xì)胞計數(shù)法，反應(yīng)的就是細(xì)胞真實的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測，則是通過檢測細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化，進而判斷藥物或處理措施的作用，細(xì)胞活性檢測所得結(jié)論，往往反映了實驗設(shè)計的目的。

　　細(xì)胞增殖檢測，因檢測標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。細(xì)胞活性檢測通常包括細(xì)胞膜對核酸染料的通透性、代謝活性、膜電位等的檢測，確定細(xì)胞的代謝活?或細(xì)胞代謝產(chǎn)物，通過檢測細(xì)胞的氧化還原活性反映細(xì)胞增殖能?。

二、常見細(xì)胞增殖檢測方法

1.DNA合成檢測——BrdU / EdU檢測法

　　細(xì)胞在增殖過程中，DNA的倍增，是顯著的變化之一，通過檢測DNA量的變化，可判斷細(xì)胞數(shù)量的變化。通過檢測DNA進行細(xì)胞增殖檢測方法，除了同位素標(biāo)記DNA外，常用的就是：BrdU / EdU檢測法。BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶（T）的衍生物，可代替胸腺嘧啶在摻入S期的DNA合成，然后利用抗Brdu的單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細(xì)胞，如果與其它細(xì)胞標(biāo)記物進行雙染，則可判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度，對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。

　　Edu檢測法是BrdU的替代方法，也是目前更廣泛適用的方法，RrdU需抗體在破開DNA雙聯(lián)后與抗原分子集合后才能顯示，這個處理過程對細(xì)胞有損傷，而EdU同樣可以代替胸腺嘧啶（T）滲入DNA，但其分子大小只有BrdU的1/500，可以直接在DNA雙鏈形態(tài)下與染料分子結(jié)合用于檢測，無需抗體結(jié)合反應(yīng)，實驗過程簡單，對細(xì)胞損傷小，是新一代基于DNA檢測時報增殖的試劑。

2.代謝活性物質(zhì)檢測——MTT、CCK8

　　MTT與CCK8兩種方法都是利用檢測細(xì)胞內(nèi)線粒體中琥珀酸脫氫酶濃度，進而反映細(xì)胞增殖活性。MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)被琥珀酸脫氫酶還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（formazan）并堆積在細(xì)胞內(nèi)，然后以DMSO溶解甲瓚，通過檢測甲瓚的吸光度來間接反映存活細(xì)胞的相對數(shù)量。

　　CCK8中的主要物質(zhì)WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶還原生成橙黃色的、水溶性formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；反之，則顏色越淺。CCK-8的原理跟MTT其實是相同的，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機溶劑溶解這個步驟，對細(xì)胞毒性小，可進行活細(xì)胞動態(tài)測定，試劑穩(wěn)定即開即用，重復(fù)性好于MTT。

3.細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測

　　Ki-67,PCNA都是細(xì)胞增殖因子，在細(xì)胞異常增殖中均有顯著的表達差異，是研究腫瘤細(xì)胞增殖的重要核抗原。Ki-67,PCNA均與細(xì)胞周期密切相關(guān)，通過免疫反應(yīng)檢測Ki-67,PCNA可反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖情況。

4.ATP濃度檢測

　　細(xì)胞內(nèi)的ATP是細(xì)胞能量的重要來源，其含量與細(xì)胞周期和細(xì)胞狀態(tài)關(guān)系密切，死細(xì)胞或瀕臨死亡的細(xì)胞幾乎不含ATP。在細(xì)胞中測得的ATP濃度與細(xì)胞數(shù)之間存在嚴(yán)格的線性關(guān)系。利用熒光素酶Luciferase及其底物熒光素Luciferin的ATP檢測以生物發(fā)光為基礎(chǔ)，能夠為您提供非常靈敏的結(jié)果。如果有ATP存在熒光素酶就會發(fā)光，而且其發(fā)光強度與ATP濃度成正比，這種方法非常適用于高通量細(xì)胞增殖檢測和篩選。Promega公司開發(fā)的CellTiter-Glo Luminescent 實現(xiàn)了"加樣－混合－測量"的簡單快速檢測模式，CellTiter-Glo試劑和細(xì)胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容，如RPMI 1640, MEM, DMEM, 和Ham's F12，且不受酚紅和有機溶劑的影響，可用于高通量自動化篩選（HTS）。

5.羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）檢測法

　　羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料，具有與細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)特異性結(jié)合的琥珀酰亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，CFSE進入細(xì)胞后可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞分裂時，CFSE標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，子代細(xì)胞熒光強度是親代細(xì)胞的一半，在一個增殖的細(xì)胞群中，各連續(xù)代細(xì)胞的熒光強度遞減，利用流式細(xì)胞儀在488nm激發(fā)光和熒光檢測通道可對其進行分析。

三、細(xì)胞增殖/活性檢測方法比較

常見細(xì)胞增殖/活性檢測方法比較見下表（含李記生物產(chǎn)品、貨號）